棉花叶片和根系中SOD、POD、CAT、MDA的测定
研究表明逆境胁迫可使植物体内活性氧的产生和消除平衡失调,造成植物体内大量的自由基累计,进而膜脂结构的损伤和加速植物的衰老进程。测定植物体内膜脂过氧化产物MDA的含量及植物体内抗氧化酶SOD、POD的活性高低,可在一定程度上反映逆境对植物的损害程度合作植物的衰老进程。关于干旱、渍水、盐害和高温等逆境胁迫对作物候期衰老的影响的研究已有不少报道,但是在不同根土空间对作物衰老方面的研究尚不多见。张永清等研究表明高粱在不同根土空间下,根土空间缩写降低了SOD、POD的含量,而对于不同配置及水分条件下棉花根系及地上部生理活性的研究较少因此探讨不同根系空间条件下对棉花根系生理特性、棉花后期衰老的影响。
测定部位:
地上部:倒四叶地下部:上层(020cm)中层(2040cm)下层(4080cm)根样
一磷酸缓冲液的配制:A液:02M的KH2PO4溶液称取分析纯KH2PO427216克,用蒸馏水定容至1000毫升。B液:02M的K2HPO4溶液称取分析纯K2HPO43H2O45644克,用蒸馏水定容至1000毫升。或(A液:02M的NaH2PO4溶液称取分析纯NaH2PO42H2O3121克,用蒸馏水定容至1000毫升。B液:02M的Na2HPO4溶液称取分析纯Na2HPO412H2O7164克,用蒸馏水定容至1000毫升。)二、酶液的制备:称取05g放入研钵中,加5毫升PH78的磷酸缓冲液,冰浴研磨,匀浆倒入离心管中,冷冻离心20分钟(10000转分钟),上清液(酶液)倒入试管中,置于040C下保存待用。SOD(超氧化物歧化酶)的测定:1SOD反应液的配制:
母液的配制:(1)005M磷酸缓冲液(PH78):A液2125mlB液22825ml定容至1000ml2130mMMet甲硫氨酸:取19399克Met用磷酸缓冲液定容至100ml;(3)750μM四氮唑蓝(NBT):取006133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml;4100μMEDTANa2取00372gEDTANa2用磷酸缓冲液定容至1000ml,避光保存;520μMFD核黄素000753gFD用磷酸缓冲液定容至1000ml。SOD反应液:磷酸缓冲液:Met:NBT:EDTANa2:核黄素(FD):H2O的比例为15:
3:3:3:3:25,按母液顺序配制。2SOD的测定:取型号相同的试管,吸取20微升的酶液,加入3毫升,4000Lux照光30
分钟,同时取四支试管,三支做对照,一支做空白(不加酶液,以缓冲液代替);空白置暗处,对照(CK)与酶液同置于4000Lux条件下照光30分钟,遮光保存,以空白调零,560
m比色。3结果计算SOD总活性(吸光度gFW)(ACKAE)×V/(W×05×ACK)单位:NBT光还原50为单位SOD比活性(酶单位mg蛋白)SOD总活性蛋白质浓r