上海大学生命科学实验中心
实
课学程：号：生物化学实验15122013
验
姓
预
习
报
告
日期：指导老师：湿度：
名：沈诗怡
同组者：贺婷婷温度：
实验时间：
（一律用A4纸、钢笔书写或打印，不得涂改，经教师签字后方为有效，附在实验报告中一并交。如无此原始记录或丢失，报告不批示成绩）实验名称：3，5二硝基水杨酸比色定糖实验目的：1掌握3，5二硝基水杨酸法定糖的原理及方法。2熟悉分光光度计的原理及使用方法。实验原理：
HCOHOCOHHCOH
糖类的测定方法有物理方法和化学方法两
还原糖（碱）
COH
HCOH
H2COH
HCOH
H2COH
类。由于化学方法比较准确，常常使用之。还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基和酮基的糖类。双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶
O2N
烯二醇（碱）加热
COOHOH
糖酸
COOHOH
NO2
O2N
NH2
解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸
35二硝基水杨酸（黄色）
3氨基5硝基水杨酸（棕红色）
水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，35二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3氨基5硝基水杨酸。在一定范围内，棕红色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正比。在520
m波长下测定棕红色物质的消光度值，查标准曲线，便可求出样品中还原糖的含量。该法是半微量定糖法，操作简便、快速，杂质干扰较少。多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以09。实验仪器及试剂：试剂：11mgmL1葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在80℃烘至恒重），置于小烧
杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100mL的容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中
f保存备用。235二硝基水杨酸试剂：63g35二硝基水杨酸和262mL2molLNaOH溶液，加到500mL含有
185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。实验操作：（一）葡萄糖标准曲线的制作，按表11项目葡萄糖液（ml）蒸馏水（ml）空白020102180215204160415306140615408120815510101015
相当葡萄糖量（mg）0DNS试剂（ml）加热冷却吸光度（A520）15
均在沸水浴中加热5mi
立即用流动冷水冷却
将以上各管溶液r