实验常用试剂、缓冲液的配制
试剂
1MTrisHCl(pH667476等)
成分用量
Trisbase1211g
配制方法
加入约800mL的去离子水,加入浓盐酸调节pH值,定容至1L。室温保存。加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。用浓盐酸调pH值至88,定容至1L。室温保存。加入80mL的去离子水,68℃加热溶解。浓盐酸调节pH值至72,定容至100mL,室温保存。加入约800mL的去离子水后搅拌溶解后定容至1L。加入到50mL塑料离心管内。加20mL的001M的NaOAc(pH52),溶解后使用022μm滤器过滤除菌。适量分成小份,20℃保存。置于50mL离心管中。加入40mL灭菌水,溶解后定容至50mL。用022μm滤膜过滤除菌。分装(1mL份)后,20℃保存。置于50mL离心管中。加入40mL灭菌水,溶解后定容至50mL。用022μm滤膜过滤除菌。分装(1mL份)后,20℃保存。置于50mL离心管中。加入10mL灭菌水,充分混合溶解后,定容至21mL。用022μm滤膜过滤除菌。分装(1mL份)后,20℃保存。加入10mL的去离子水后搅拌溶解,贮存于20℃。注意:10%过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右。
15MTrisHCl(pH88)
Trisbase
1817g
10%(WV)SDS
SDS
10g100mL
5MNaCl
NaCl
2922g
1MDTT
DTT
309g
100mgmlAmpicilli
Ampicilli
5g50mL
100mgml
ka
amyci
sulfate
Ka
amyci
sulfate5g50mL
1MIPTG
IPTG
5g21mL
10%(WV)过硫酸铵(AP)
Sodiumpersulfate
1g10mL
f10×PBS(T)Buffer
NaClKClNa2HPO4KH2PO4Twee
20
80g2g142g27g10mL
称量各试剂置于1L烧杯中。向烧杯中加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。滴加HCl将pH值调节至74,(量取10mLTwee
20)定容至1L。(高温高压灭菌后)室温保存。称量各试剂置于1L烧杯中。向烧杯中加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。滴加HCl将pH值调节至74,(量取10mLTrito
X100)定容至1L。室温保存。先称量Trisbase和甘氨酸,加入约800mL的去离子水,搅拌溶解后加入100mL10SDS100mL并加去离子水定容至1L后,室温保存。先配置1MTrisHCl溶液pH68,量取BPB,置于100mL烧杯中并加入10mL去离子水溶解,加入其余试剂定容至100mL摇匀后用滤纸过滤残渣。于室温保存(1mL份)。分装后在使用前将25μl的2ME加到每小份中。(加入2ME的Loadi
gBuffer可在室温下保存一个月左右)先称量Trisbase和甘氨酸,加入约600mL的去离子水,搅拌溶解后定容至1L,储存于4℃。使用时取100mL溶液稀释至800mL,加入200mL甲醇配置为工作液。称取R250,置于烧杯。加入250mL的乙醇,搅拌溶解后加入100mLr