富、液泡小、细胞核大(胚性细胞特征)③酶解细胞壁→原生质体培养→新植株(2)用途:微型繁殖、制造人工种子胚状体阶段、单倍体育种、作物脱毒(植物分生组织细胞,分裂旺盛病毒极少Cf抗病毒)、在培养基中加入不同浓度的氯化钠溶液,可诱发和筛选抗盐植株细胞产物工厂化生产(愈伤组织阶段已可,试管培养苗、细胞培养反应器也可)3原生质体融合植物体细胞杂交(不同植物)获得原生质体:在甘露醇溶液环境(较高渗透压)中用纤维素酶和果胶酶混合液处理用网筛过滤原生质体到离心管内,离心后收集沉淀物,用等渗溶液洗涤;检验原生质体是否符合要求:依据渗透作用原理,采用低渗胀破法
f(见比较表格)4植物细胞工程:培养植物细胞(包括原生质体),借用基因工程技术将外源DNA导入受体细胞或通过细胞融合将不同源的遗传物质重新组合,再通过细胞培养,获得具有特定性状的植株Cf细胞工程:细胞培养和细胞融合(若基因型不同为细胞杂交)基因定位:利用细胞杂交中染色体丢失与特定基因产物的对应关系
(三)动物细胞工程
1动物细胞培养指明“动物”细胞培养(1)概念:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖。原理:细胞增殖(2)动物细胞培养:①取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)②机械消化或用胰蛋白酶处理分散成单个细胞(利于细胞与培养液充分接触,进而吸收氧气和营养物质并排出废物)③制成细胞悬液→转入细胞培养瓶卡式瓶中进行原代培养细胞间相互依存,呈现一定程度的组织特性,保持生长分裂、接触抑制、衰老死亡④贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理使贴壁细胞从瓶壁上脱落下来并分散成单个细胞稀释分装传代培养(最初的若干次传代也归入原代培养)大多数细胞最终衰老、凋亡(①营养物质耗尽②遗传物质没变,衰老凋亡)动物组织培养:动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性可伴随组织分化,但主要的生命活动仍以细胞为单位;由于细胞运动变化,培养物组分发生变异,长期培养最终成为简单的细胞培养(3)细胞贴壁和接触抑制:悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。细胞数目不断增多,当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。(4)动物细胞培养条件(液体培养基)①无菌无毒:培养液和用具无菌处理,一定量的抗生素(种、量)r