植物表达载体
二、试剂：液氮YEB液体培养基（1L）：酵母提取物1g，牛肉膏5g，蛋白胨5g，蔗糖5g，MgSO47H2O05g，pH70，高压灭菌。YEB固体培养基：每升YEB液体培养基加15g琼脂粉，高压灭菌。卡那霉素（Ka
）储液：50mgml利福平（Rif）储液：50mgmlYEB固体培养基平板（Ka
抗性）：灭菌后的YEB固体培养基待其温度降至50℃时加入卡那霉素（Ka
）和利福平（Rif），至终浓度分别为100gml和50gml，混匀后立即倒入培养皿，凝固后4℃倒置保存。［实验步骤］1、在200l感受态细胞中加入2－6l质粒（pBI121）DNA，冰浴5mi
，液氮中速冻5mi
；2、迅速转入37℃水浴中，热激5mi
；3、加入1mlYEB液体培养基，28℃慢速振荡培养2－4小时；4、3000rpm离心4mi
，去一部分上清，留取200l菌液涂布于含有50gmlKa
和50gmlRif的YEB平板；5、放置约05h，待水份干后，28℃培养约24小时至长出菌落。
实验三农杆菌转化子的鉴定
［目的及要求］掌握农杆菌质粒DNA的提取方法。将从农杆菌提取的质粒与对照质粒同时电
泳，通过比较确定获得了农杆菌转化子。［实验原理］
f经改造的Ti质粒（只含有帮助TDNA跳到植物染色体上的Vir区）存在于农杆菌工程菌株中，含有TDNA的双元载体（Bi
oryVectors）完成重组后可以在大肠杆菌中扩增，再转入农杆菌中。从抗性培养基上筛选得到的农杆菌转化子中应携带转入的重组质粒，而对照菌株则没有。
碱裂解法是一种应用最为广泛的质粒DNA提取方法，该法用于从小量培养物中抽提质粒DNA，比较方便、省时，提取的DNA质量较高，可用于DNA的酶切、PCR甚至测序。提取质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而使其分离。当细胞在NaOH和SDS溶液中裂解时，在pH高达126的碱性条件下，蛋白质和染色体DNA发生变性，染色体DNA的氢键断裂、双螺旋结构解开，而质粒DNA虽大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当加入中和液醋酸钾或醋酸钠高盐缓冲液时，质粒DNA恢复原来的构型，而染色体DNA不能复性，形成缠绕的网状结构，通过离心，染色体DNA、蛋白质SDS复合物随细胞碎片等沉淀下来，质粒DNA则留在上清中。［实验仪器、材料和试剂］
一、仪器：台式高速离心机，高压灭菌锅，恒温摇床，恒温水浴，电泳仪及电泳槽，紫外灯，加样器（pipettor），小离心管（eppe
dorftube），吸头（tip），三角瓶，牙签。
二、材料：含质粒的农杆菌LBA4404（或EHA105），农杆菌LBA4404或EHA105）三、试剂：YEB液体培养基（1L）：酵母提取物1g，r