铜陵中山医院实验室微生物操作sop文件
支原体培养鉴定及药敏操作规程
1目的支原体是缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，也是目前所知能在人工培养基中生长繁殖的最小微生物，呈多形态性，基本为球形，亦可呈球杆状或丝状，可通过除菌滤器。支原体种类繁多，分布广泛，已分离到150多种，而人体支原体至少有15种，其中对人类有致病作用的主要有：肺炎支原体、解脲脲原体、人型支原体和生殖道支原体。在这里主要是介绍解脲脲原体和人型支原体的培养检测程序。2范围采集生殖道或尿道标本检测解脲脲原体和人型支原体。适用于尿液、尿道分必物、前列腺液、精液和宫颈分泌物等。3培养程序31形态与培养特性支原体没有细胞壁，形态多形性，但主要有三种基本形态：球形、双球形和丝状。革兰染色阴性，但不易着色，姬姆萨染色着色较好，呈淡紫色。支原体营养要求较高，一般以牛心浸液为基础，再添加1020的动物血清及10的新鲜酵母浸液。支原体最适pH为78～80，低于pH70则死亡，一般为兼性厌氧菌，个别菌种为专性厌氧菌。该菌生长缓慢，在支原体培养基中典型菌落呈“油煎蛋”样，其中以肺炎支原体的菌落最大，解脲脲原体的菌落最小，宜在低倍镜下观察。支原体在液体培养基中生长量较少，一般不易浑注。32程序步骤321标本取样后立即送检，必须在2h以内接种，2～8℃保存不超过5h，尿液标本应在膀胱内停留2h以上，新鲜标本取10ml经3000rmi
离心15mi
对样本进行浓集后取02ml沉淀进行培养。322试剂盒放置至室温后，在编号区标上编号，取出试剂，将稀释液加到培养基干粉瓶的29ml标线处，摇匀待干粉完全溶解后吸50ul到C孔，作为阴性对
f照孔。323将拭子或样本（尿液或液体标本取离心后的沉淀02ml）加入培养液中，
拭子应稍加用力挤压旋转数次，使样本充分溶解于培养液，弃拭子，用移液器分
别吸50ul培养液加入余下各孔中，然后每孔滴加二滴无菌液状石蜡，盖上盖，
置35～37℃孵箱中培养，分别于24h观察解脲脲原体和48h观察人型支原体
的培养及药敏结果。
324结果判读，阴性对照孔培养液淡黄清亮，支原体培养孔颜色由黄变红，表
明有支原体生长“”，不变色（黄色）表明无支原体生长（“一”）；阴性对照
孔：红色，表示污染，试验无效；阴性对照孔：黄色（一），试验有效。药敏
结果：两管均为黄色为敏感；两管均为红色为耐药；低浓度管红色而高浓度管黄
色为中度敏感。培养及药敏结果分别见下表
试剂孔名反应结果反应结果反应结果反r