度多态性（polymerasechai
reactio
2restrictedfrogme
le
gthpolymor2phism，PCRRFLP）方法，检测了早发、迟发CHD患者与对照者的ApoE基因型，目的在于探讨ApoE基因遗传变异与多态性对早发CHD的作用及其对血脂水平的影响。
f111
资料与方法
一般资料
样品来源于2003年10月至2004年11月住院患者，早发CHD组92例，50例，男女42例，年龄38，57，平均（4816±410）岁；迟发CDH组237例，男135例，女102例，年龄60，89，平均（6719±515）岁。对照组220例门诊体检者，汉族，男121例，女99例，年龄46，76，平均（6314±610）岁。CHD分组年龄的界定参照中国医学科学院重点项目冠心病遗传因素的研究进展”］HD诊断按照1981年［4。C全国冠心病诊断标准确定。对照组均未患CHD。研究个体之间无血缘关系。12方法所有受试对象均空腹12，14h后，于清晨6，7时取卧位肘静脉血，置EDTA和肝素抗凝血各一管，分别供血脂检测和载脂蛋白E基因分型用。血脂检测：高血脂症根据WHO诊断标准甘油三酯（TG）≥517mmol／L和（或）总胆固醇（TC）≥117mmol／L确诊，排除肝、肾、甲状腺病变和糖尿病等。用酶法测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL2C）免疫比浊法测定载脂蛋白A1和；载脂蛋白B100；直接法测定高密度脂蛋白胆固醇（HDL2C）poE基因型测定：按常。A规方法提取DNA。上游引物：5′TC2CAAGGAGCTGCAGGCGGCGCA3′，下游引物：5′ACAGAATTCGCCCCGGCCTGGTACACT2GCCA3′。PCR反应体系为1215μl，其中包含模板基因组DNA50，100
g，4×脱氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）各215mmol，PCR引物［ApoE前引物（F）poE后引、A物（R）］各5μmol，DNA聚合酶（rTaq）015U，二甲亚砜（DMSO）015μl。PCR循环条件采用TouchDow
程序：（1）94℃30s，68℃30s（每个循环降低015℃），72℃30s，共12个循环；）94℃30s，62℃30s，72℃30s，共20个（2循环。反应产物1琼脂糖凝胶电泳，紫外线分析仪检测227bpPCR特异性扩增产物。使用HhaI限制性内切酶37oC水浴消化6h。聚丙烯酰胺凝胶电泳分离酶切产物，Pbr3228以／MspIMarker酶切片段作为DNA片段的标准物。用银染的方法进行显带。经特异性限制性内切酶消化后，可出现6种片段大小的组合：即E3／3：91，48bp；E2／2：91，81bp；E3／2：91，81，48bp；E3／4：91，72，48bp；E2／4：91，81，72，48bp；E4／4：72，48bp。13
统计分析
计量资料组r