高效液相色谱的操作步骤及常见问题分析
高效液相色谱的常见问题分析高效液相色谱仪操作步骤1．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。2．对抽滤后的流动相进行超声脱气1020分钟。3．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4．进入HPLC控制界面主菜单，点击ma
ual，进入手动菜单。5．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在ma
ual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10mlmi
。6．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击i
jure，选用合适的流速，点击o
，走基线，观察基线的情况。7．设计走样方法。点击file，选取selectusersa
dmethods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击
ewmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a进样前的稳流，一般25分钟；b基线归零；c进样阀的loadi
gi
ject转换；d走样时间，随不同的样品而不同。8．进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postru
，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。9．关机时，先关计算机，再关液相色谱。10．填写登记本，由负责人签字。注意事项：1．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。2．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。3．所有过柱子的液体均需严格的过滤。4．压力不能太大，最好不要超过2000psi提高HPLC检测限、溶剂脱气等的几点经验
仅针对用反相碳十八烷基硅烷化填料的柱子和紫外检测器的HPLC通常在理论教学时，HPLC分析总要求实用HPLC纯的试剂、用孔径比填料粒度小的微孔滤膜过滤流动相、最好用真空或氦气脱气。实际上，按照不同的精确度，有时候并不需要做得那么严格。这里首先申明，虽然许多做法是我的经验，但请读到这篇文章的朋友自己做个判断，如果按我说的做，造成任何损失，我深表遗憾，但我不承担任何责任。这篇文章仅供交流和讨论。
关于HPLC纯。我想这里关键是两点：纯度高、紫外吸收小。纯度高一方面，没有杂质干扰测定；另一方面不会有金属离子损害纯度为9999以上的高纯度硅胶基质。但如果你的r