的基因，t7溶菌酶能降低目的基因的背景表达水平，但不干扰iptg诱导的表达。适于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。2）携带有pet15bvector和pet15bfima的大肠杆菌top10（本课题组前期实验获得）。其中pet15bvector：原核表达载体，双链环状d
a，由5708bp组成，含有可插入外源基因的多克隆位点（mcs）、amp抗性基因、t7lac、t7promoter、lacoperator、t7termi
ator、
末端histag（6个组氨酸）。是一种组氨酸融合表达载体，这6个组氨酸标签便于用钴柱纯化或以抗组氨酸抗体筛选。pet15b载体读框及多克隆位点见图31，其克隆、表达区见图32。图31原核表达载体质粒pet15b图谱图32pet15b载体克隆、表达区312主要试剂1）d
amarkervi：北京天为时代科技有限公司2）预染蛋白质marker：北京天根生化科技有限公司3）细菌lb培养基（胰蛋白胨、酵母提取物）：promega公司
f4）琼脂糖（agarose）：上海生工生物技术有限公司6）脱氧胆酸钠：上海亚培生物科技有限公司7）丙烯酰胺、双丙烯酰胺、四甲基二乙胺（temed）、十二烷基磺酸钠sds、二硫苏糖醇（dtt）、异丙基βd硫代半乳糖苷（iptg）、tris碱、甘氨酸、溴酚蓝：amrescousa8）考马斯亮蓝（brillia
tbluer250）：上海绿岛科技发展有限公司分装9）ecl底物化学发光试剂盒：piercebiotech
ologyusa10）质粒小提试剂盒：北京天为时代科技有限公司11）硝酸纤维素膜（
c膜）：浙江省台州市四甲生化厂12）一抗（a
tihisa
tibody，小鼠单克隆抗体igg2b）：北京天根生化科技有限公司13）二抗（goata
timouseigg，hl，perpxidaseco
jugated）：piercebiotech
ologyusa14）脱脂奶粉：完达山乳业股份有限公司15）其他生化试剂如溴化乙锭（eb）、冰醋酸、甲醇、过硫酸铵、无水乙醇、
acl、cacl2、mgcl2、氨苄青霉素、氯霉素等，均为进口或国产试剂313实验仪器1）自动双重纯水蒸馏器sz93：上海亚荣生化仪器厂2）超纯水设备elix3milgb：法国millipore公司5）电热恒温干燥箱ph030：上海市实验仪器厂有限公司6）数控超声波清洗器kq500de型：昆山市超声仪器有限公司7）全自动高压灭菌锅hv50：日本hirayama8）塑料薄膜封口机sg200型：上海凯明电子机械有限公司9）紫外线消毒灯zsz：北京海淀空后高温复合材料厂10）生物型洁净工作台bcm1000a：苏净集团安泰公司11）微量移液器research单道多道：eppe
dorf12）恒温培养箱hhb11420bs：上海安亭13）大型摇床qyc211：上海福马实验设备有限公司14）空气浴震荡器hzqc：哈尔滨市东明医疗器械厂15）离心机（台式低速）tdl40b：上海安亭科r