生物化学实验报告
姓学
名：号：
专业年级：组别：
生物化学与分子生物学实验教学中心
f实验名称实验日期合作者评分
一、实验目的
1、掌握薄层层析法的一般原理。
氨基酸的薄层层析
2018117实验地点指导老师教师签名批改日期
2、掌握氨基酸薄层层析法的制版、点样、层析和显色等基本操作技术。3、掌握如何根据移动速率（Rf值）来鉴定被分离的物质（即本次实验中氨基酸混合液）。
二、实验原理
1、薄层层析原理（色谱分析技术的一种）：一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。（即通过吸附解吸再吸附再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来）2、氨基酸与茚三酮的显色反应：茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨及醛，与此同时，还原茚三酮又与氨及茚三酮缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。3、以相对迁移率Rf值来判定氨基酸的种类：层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。Rf原点到层析斑点中心的距离原点到对应斑点前沿的距离由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。
f三、材料与方法：
1、实验材料：（1）实验试剂：氨基酸的异丙醇溶液：丙氨酸、精氨酸、甘氨酸分析样品：混合氨基酸溶液吸附剂：硅胶粘合剂：05的羧甲基纤维素钠展开显色剂（正丁醇、乙酸、茚三酮溶液）（2）实验器材：天平、层析板、尺子、铅笔、烧杯、玻璃棒、量筒、毛细玻璃管、层析缸、药匙、烘箱2、实验方法：（1）实验流程：
制版点样层析显色处理与结果分析
（2）实验步骤：步骤①制作硅胶层析板操作1、调浆称取硅胶3克，加05的羧甲基纤维素钠8毫升，调成均匀的糊状。2、涂布取洁净的干燥玻璃板均匀涂层。3、干燥将玻璃板水平放置，室温下自然凉干。4、活化70℃烘干30分钟。切断电源，待玻璃板面温度下降至不烫手时取出。②在层析板上加氨基酸样1、标记：用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点。品每个样品间相距约1cm。2、取样：用毛细管分别吸取氨基酸溶液，取样量为毛细
f管柱高5cm。3、点样：点样毛细管轻轻接触薄层表面点样。加样后原点扩散直径不超过2mm。③对氨基r