饲料中维生素Ｂ2测定方法
1主题内容与适用范围
本标准规定了饲料中维生素B2测定方法。本标准适用于饲料原料、协作饲料、浓缩饲料、维生素预混料中维生素B2的测定。待测液中维生素B2检测浓度为005～02μg／mL。
2引用标准
GB6682试验室用水规格
3方法原理
维生素B2（即核黄素C17H20N1O6）在440
m紫外光激发下产生绿色荧光，在一定浓度范围内其荧光强度与核黄素浓度成正比。用连二亚硫酸钠还原核黄素成无荧光物质，由还原前后荧光强度之差与内标荧光强度的比值，计算样品核黄素的含量。
4试剂和溶液
除特别规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或
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f相应纯度的水。41盐酸溶液，01mol／L：将85mL盐酸（GB622）用水
稀释至1000mL。42盐酸溶液，1mol／L。43氢氧化钠（GB629）溶液，1mol／L。44冰乙酸（GB676）。45冰乙酸溶液，002mol／L：将18mL冰乙酸用水稀释
至1000mL。46高锰酸钾（GB643）溶液，40g／L。47过氧化氢（HG3─1082）溶液，100mL／L。现用现配。48核酸素标准溶液481核黄素贮备液Ⅰ：核黄素（中国药典参照标准），于五
氧化二磷干燥器中干燥24h，称取00500g，溶解于002mol／L乙酸溶液（45）中，在蒸汽浴上恒速搅动直至溶解，冷却后稀释至500mL。盛入棕色瓶滴加甲苯掩盖，低温（4℃）保存。
该溶液每毫升含01mg核黄素。482核黄素贮备液Ⅱ：取核黄素贮备液Ⅰ（481）10mL用002mol／L乙酸溶液稀释至100mL，盛于棕色瓶中滴加甲苯掩盖，低温（4℃）保存。该溶液每毫升中含10μg核黄素。483核黄素标准工作液：取核黄素贮备液Ⅱ（482）10mL，用水稀释至100mL。现用现配。该溶液每毫升中含1μg核黄素。
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f49荧光素标准溶液491荧光素贮备液：称取荧光素（Q／HG22─786）00500g，用水稀释至1000mL，盛于棕色瓶中，低温（4℃）保存。该溶液每毫升中含50μg荧光素。492荧光素标准工作液：取荧光素贮备液（491）1mL，用水定容至1000mL，盛入棕色瓶中，低温保存。该溶液每毫升中含005μg荧光素。410溴钾酚绿pH指示剂：取溴钾酚绿（HGB3386）01g，加氢氧化钠溶液（005mol／L）28mL使之溶解，再加水稀释至200mL。变色范围ph46～52。411连二亚硫酸钠（Na2S2O4）（Q／HG2─001），防止吸潮。
5仪器、设备
51荧光分光光度计。52分析天平：感量00001g。53电热恒温水浴。54具塞玻璃刻度试管，15mL。
6试样的制备
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f采集具有代表性的样品至少500g，四分法缩减至100g，磨碎，通过028mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。
7分析步骤
71称样：单一r